عند استخدام الماصة لحجم يتراوح من 0.2 إلى 5 ميكرولتر، فإن دقة الماصة لها أهمية قصوى، كما أن تقنية الماصة الجيدة ضرورية لأن أخطاء التعامل تكون أكثر وضوحًا مع الأحجام الصغيرة.
مع تزايد التركيز على تقليل الكواشف والتكاليف، يزداد الطلب على الكميات الأصغر، على سبيل المثال، لتحضير مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل الرئيسي (PCR Mastermix) أو تفاعلات الإنزيم. لكن استخدام الماصات بكميات صغيرة تتراوح بين 0.2 و5 ميكرولتر يُمثل تحديًا جديدًا لدقة الماصات ودقتها. النقاط التالية أساسية:
- حجم الماصة ورأسها: اختر دائمًا الماصة ذات أقل حجم اسمي ممكن وأصغر رأس للحفاظ على أصغر حجم ممكن للوسادة الهوائية. عند سحب ١ ميكرولتر، على سبيل المثال، اختر ماصة بحجم ٠.٢٥ - ٢.٥ ميكرولتر ورأسًا مطابقًا لها، بدلًا من ماصة بحجم ١ - ١٠ ميكرولتر.
- المعايرة والصيانة: من الضروري معايرة الماصات وصيانتها بشكل صحيح. تؤدي التعديلات الطفيفة وتعطل الأجزاء في الماصة إلى زيادة كبيرة في قيم الأخطاء المنهجية والعشوائية. يجب إجراء المعايرة وفقًا للمعيار ISO 8655 مرة واحدة سنويًا.
- ماصات الإزاحة الموجبة: تأكد من وجود ماصة إزاحة موجبة ذات نطاق حجم منخفض في مختبرك. بشكل عام، يؤدي استخدام هذا النوع من الماصات إلى نتائج ماصة أفضل من حيث الدقة والضبط مقارنةً بالماصات التقليدية ذات الوسادة الهوائية.
- حاول استخدام أحجام أكبر: يمكنك تخفيف العينة لسحب كميات أكبر بنفس الكمية في التفاعل النهائي. هذا يُقلل من أخطاء السحب باستخدام أحجام عينات صغيرة جدًا.
بالإضافة إلى أداة جيدة، يجب أن يمتلك الباحث تقنية ماصة ممتازة. انتبه جيدًا للخطوات التالية:
- تثبيت الطرف: لا تُعلق الماصة على الطرف، فقد يؤدي ذلك إلى إتلاف طرف الطرف الدقيق، مما قد يؤدي إلى إعادة توجيه شعاع السائل أو إتلاف الفتحة. اضغط برفق فقط عند تثبيت الطرف، واستخدم ماصة مزودة بمخروط طرف زنبركي.
- حمل الماصة: لا تمسك الماصة في يدك أثناء انتظار جهاز الطرد المركزي أو جهاز الدورة وما إلى ذلك. سوف يسخن الجزء الداخلي من الماصة مما يؤدي إلى تمدد الوسادة الهوائية مما يؤدي إلى انحرافات عن الحجم المحدد عند سحب الماصة.
- الترطيب المسبق: يعمل ترطيب الهواء داخل الطرف والماصة على تحضير الطرف للعينة وتجنب التبخر عند شفط حجم النقل.
- الشفط الرأسي: وهو أمر مهم للغاية عند التعامل مع أحجام صغيرة لتجنب التأثير الشعري الذي يحدث عندما يتم حمل الماصة بزاوية.
- عمق الغمر: اغمر رأس المحقنة بأقل قدر ممكن لمنع دخول السائل إليها بسبب التأثير الشعري. كقاعدة عامة: كلما صغر رأس المحقنة وحجمها، قل عمق الغمر. نوصي باستخدام 2 مم كحد أقصى عند سحب كميات صغيرة.
- التوزيع بزاوية 45 درجة: يتم ضمان التدفق الأمثل للسائل عندما يتم تثبيت الماصة بزاوية 45 درجة.
- ملامسة جدار الوعاء أو سطح السائل: لا يمكن توزيع الكميات الصغيرة بدقة إلا عند تثبيت طرف المحقنة على جدار الوعاء أو غمرها في السائل. حتى آخر قطرة من طرف المحقنة يمكن توزيعها بدقة.
- النفخ: يُعدّ النفخ إلزاميًا بعد توزيع كميات قليلة لتوزيع آخر قطرة سائلة موجودة في فوهة المحقنة. يجب أيضًا إجراء النفخ على جدار الوعاء. احرص على عدم دخول فقاعات الهواء إلى العينة عند نفخها على سطح السائل.
وقت النشر: ١٨ فبراير ٢٠٢١