ክሪዮቪየሎችበፈሳሽ ናይትሮጅን በተሞሉ ደዋሮች ውስጥ የሕዋስ መስመሮችን እና ሌሎች ወሳኝ ባዮሎጂካል ቁሳቁሶችን ለማከማቸት በብዛት ጥቅም ላይ ይውላሉ።

በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ሴሎችን በተሳካ ሁኔታ ለመጠበቅ በርካታ ደረጃዎች አሉ. መሰረታዊ መርሆው ቀስ ብሎ ማቀዝቀዝ ቢሆንም, ትክክለኛው ዘዴ ጥቅም ላይ የዋለው የሴል ዓይነት እና ክሪዮፕሮቴክታንት ይወሰናል. በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ውስጥ ሴሎችን በሚከማቹበት ጊዜ ግምት ውስጥ መግባት ያለባቸው በርካታ የደህንነት ጉዳዮች እና ምርጥ ልምዶች አሉ።

ይህ ጽሑፍ ክሪዮቪየል በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ እንዴት እንደሚከማች አጠቃላይ እይታ ለመስጠት ያለመ ነው።

Cryovials ምንድን ናቸው?

ክሪዮቪል የፈሳሽ ናሙናዎችን እጅግ በጣም ዝቅተኛ በሆነ የሙቀት መጠን ለማከማቸት የተነደፉ ትናንሽ እና የታሸጉ ጠርሙሶች ናቸው። በክሪዮፕሮቴክታንት ውስጥ የተጠበቁ ህዋሶች ከፈሳሽ ናይትሮጅን ጋር በቀጥታ እንዳይገናኙ ያረጋግጣሉ፣ ይህም የሴሉላር ስብራት ስጋትን በመቀነሱ በፈሳሽ ናይትሮጅን ከፍተኛ የማቀዝቀዝ ውጤት ተጠቃሚ ይሆናሉ።

ጠርሙሶች ብዙውን ጊዜ በጥራዞች እና በንድፍ ውስጥ ይገኛሉ - ከውስጥም ሆነ ከውጭ በጠፍጣፋ ወይም በተጠጋጋ የታችኛው ክፍል ውስጥ ሊጣበቁ ይችላሉ። የጸዳ እና የጸዳ ያልሆኑ ቅርጸቶችም ይገኛሉ።

ማን ይጠቀማልሳይሮቪያልስበፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ሴሎችን ለማከማቸት

የተለያዩ የኤንኤችኤስ እና የግል ላቦራቶሪዎች፣ እንዲሁም በኮርድ ደም ባንክ፣ በኤፒተልያል ሴል ባዮሎጂ፣ በimmunology እና ስቴም ሴል ባዮሎጂ የተካኑ የምርምር ተቋማት ህዋሶችን ለመጠበቅ ክሪዮቪየሎችን ይጠቀማሉ።

በዚህ መንገድ የተጠበቁ ህዋሶች ቢ እና ቲ ህዋሶች፣ የ CHO ህዋሶች፣ የሂሞቶፔይቲክ ግንድ እና ቅድመ ህዋሶች፣ ሃይብሪዶማስ፣ የአንጀት ህዋሶች፣ ማክሮፋጅስ፣ ሜሴንቺማል ስቴም እና ፕሮጄኒተር ሴሎች፣ ሞኖይተስ፣ ማይሎማ፣ ኤንኬ ሴል እና ፕሉሪፖተንት ሴል ሴሎች ይገኙበታል።

ክሪዮቪሎችን በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ እንዴት ማከማቸት እንደሚቻል አጠቃላይ እይታ

Cryopreservation ሴሎችን እና ሌሎች ባዮሎጂካል ግንባታዎችን በጣም ዝቅተኛ በሆነ የሙቀት መጠን በማቀዝቀዝ የሚጠብቅ ሂደት ነው። ሴሎች የሕዋስ አዋጭነት ሳይጎድሉ ለዓመታት በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ሊቀመጡ ይችላሉ። ይህ በስራ ላይ የዋሉ ሂደቶች ዝርዝር ነው.

የሕዋስ ዝግጅት

ናሙናዎችን ለማዘጋጀት ትክክለኛው ዘዴ እንደ ሴል ዓይነት ይለያያል, ነገር ግን በአጠቃላይ ሴሎቹ ተሰብስበው በሴሎች የበለፀገ ፔሌት እንዲፈጠሩ ይደረጋል. ይህ ፔሌት ከ ክራዮፕሮቴክታንት ወይም ከጩኸት መከላከያ ሚድያ ጋር በመደባለቅ በሱፐርኔታንት ውስጥ እንደገና ተንጠልጥሏል።

Cryopreservation መካከለኛ

ይህ መካከለኛ ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ባላቸው አካባቢዎች ውስጥ ሴሎችን ከውስጥ እና ከሴሉላር ክሪስታሎች መፈጠርን በመከልከል እና በዚህም ምክንያት የሕዋስ ሞትን ለመጠበቅ ያገለግላል። የእነሱ ሚና በቀዝቃዛው ፣ በማከማቸት እና በሚቀልጥበት ጊዜ ለሴሎች እና ሕብረ ሕዋሳት ደህንነቱ የተጠበቀ ፣ ተከላካይ አካባቢን መስጠት ነው።

መካከለኛ እንደ ትኩስ የቀዘቀዘ ፕላዝማ (ኤፍኤፍፒ) ፣ ሄፓሪኒዝድ ፕላዝማላይት መፍትሄ ወይም ከሴረም-ነጻ ፣ ከእንስሳት ክፍል-ነጻ መፍትሄዎች እንደ ዲሜትል ሰልፎክሳይድ (ዲኤምኤስኦ) ወይም ግሊሰሮል ካሉ ክሪፕሮክተቶች ጋር ይደባለቃሉ።

እንደገና የፈሰሰው የናሙና ፔሌት እንደ ፖሊፕሮፒሊን ክሪዮቪየሎች ውስጥ ይጣላልSuzhou Ace ባዮሜዲካል ኩባንያ Cryogenic Storage Vials.

ክሪዮቪየሎችን ከመጠን በላይ አለመሙላት አስፈላጊ ነው ምክንያቱም ይህ የመሰባበር አደጋን ይጨምራል እና ይዘቱ ሊለቀቅ ይችላል (1).

ቁጥጥር የሚደረግበት የበረዶ መጠን

በአጠቃላይ፣ ቀርፋፋ ቁጥጥር የሚደረግበት የማቀዝቀዝ መጠን ለሴሎች ስኬታማ ክሪዮፕርቫይዘር ጥቅም ላይ ይውላል።

ናሙናዎች ወደ ክሪዮጅኒክ ጠርሙሶች ከተወሰዱ በኋላ እርጥብ በረዶ ላይ ወይም በ 4 ℃ ማቀዝቀዣ ውስጥ ይቀመጣሉ እና የማቀዝቀዝ ሂደቱ በ 5 ደቂቃዎች ውስጥ ይጀምራል. እንደ አጠቃላይ መመሪያ, ሴሎች ከ -1 እስከ -3 በደቂቃ (2) ፍጥነት ይቀዘቅዛሉ. ይህ የሚገኘው በፕሮግራም ሊሰራ የሚችል ማቀዝቀዣ በመጠቀም ወይም ጠርሙሶችን በ -70°C እስከ -90°C ቁጥጥር ባለው የፍጥነት ማቀዝቀዣ ውስጥ በተሸፈነ ሳጥን ውስጥ በማስቀመጥ ነው።

ወደ ፈሳሽ ናይትሮጅን ያስተላልፉ

የቀዘቀዙ ክሪዮጅኒክ ጠርሙሶች ከ -135 ℃ በታች የሆነ የሙቀት መጠን ከተጠበቁ ላልተወሰነ ጊዜ ወደ ፈሳሽ ናይትሮጂን ታንክ ይተላለፋሉ።

እነዚህ እጅግ በጣም ዝቅተኛ ሙቀቶች በፈሳሽ ወይም በእንፋሎት ደረጃ ናይትሮጅን ውስጥ በመጥለቅ ሊገኙ ይችላሉ.

ፈሳሽ ወይስ የእንፋሎት ደረጃ?

በፈሳሽ ደረጃ ናይትሮጅን ውስጥ ማከማቸት ቀዝቃዛውን የሙቀት መጠን በፍፁም ወጥነት እንደሚጠብቅ ይታወቃል ነገርግን በሚከተሉት ምክንያቶች ብዙ ጊዜ አይመከርም።

• ከፍተኛ መጠን ያለው (ጥልቀት) የፈሳሽ ናይትሮጅን አስፈላጊነት አደገኛ ሊሆን ይችላል. በዚህ ምክንያት ማቃጠል ወይም መተንፈስ እውነተኛ አደጋ ነው.
• እንደ አስፐርጊለስ፣ ሄፕ ቢ እና ቫይራል በፈሳሽ ናይትሮጅን መካከለኛ (2፣3) በተዛማች ተላላፊ ወኪሎች የተዘዋወሩ የብክለት ጉዳዮች ተመዝግበዋል (2፣3)
• በማጥለቅ ጊዜ ፈሳሽ ናይትሮጅን ወደ ጠርሙሶች ውስጥ የመግባት እድል. ከማከማቻው ውስጥ ሲወገዱ እና ወደ ክፍል የሙቀት መጠን ሲሞቁ, ናይትሮጅን በፍጥነት ይስፋፋል. ስለዚህ፣ ጠርሙሱ ከፈሳሽ ናይትሮጅን ክምችት ሲወጣ ሊሰባበር ይችላል፣ ይህም በሁለቱም የሚበር ፍርስራሾች እና ለይዘቱ መጋለጥ አደጋን ይፈጥራል (1፣ 4)።

በእነዚህ ምክንያቶች እጅግ በጣም ዝቅተኛ የሙቀት መጠን ማከማቸት በአብዛኛው በእንፋሎት ደረጃ ናይትሮጅን ውስጥ ነው. ናሙናዎች በፈሳሽ ደረጃ ውስጥ መቀመጥ ሲኖርባቸው, ልዩ ክሪዮፍሌክስ ቱቦዎች ጥቅም ላይ መዋል አለባቸው.

የእንፋሎት ደረጃው ጉዳቱ ቀጥ ያለ የሙቀት ቅልጥፍና ሊከሰት ስለሚችል በ -135 ℃ እና -190 ℃ መካከል የሙቀት መለዋወጥ ያስከትላል። ይህ የፈሳሽ ናይትሮጅን መጠን እና የሙቀት ልዩነቶች (5) በጥንቃቄ እና በትጋት መከታተል ያስፈልገዋል.

ብዙ አምራቾች እንደሚጠቁሙት ክሪዮቪየል እስከ -135 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ድረስ ለማከማቸት ወይም በእንፋሎት ደረጃ ላይ ብቻ ለመጠቀም ተስማሚ ናቸው ።

በክሪዮ የተጠበቁ ህዋሶችዎን ማቅለጥ

የማቅለጫው ሂደት ለበረደ ባህል አስጨናቂ ነው፣ እና ትክክለኛ አያያዝ እና ቴክኒክ የሕዋሶችን አዋጭነት፣ ማገገም እና ተግባራዊነት ለማረጋገጥ ያስፈልጋል። ትክክለኛው የማቅለጫ ፕሮቶኮሎች በተወሰኑ የሕዋስ ዓይነቶች ላይ ይወሰናሉ. ይሁን እንጂ በፍጥነት ማቅለጥ እንደ መደበኛ ይቆጠራል፡-

• በሴሉላር ማገገሚያ ላይ ማንኛውንም ተጽእኖ ይቀንሱ
• በቀዝቃዛው ሚዲያ ውስጥ የሚገኙትን ሶለቶች ተጋላጭነት ጊዜን ለመቀነስ ያግዙ
• በበረዶ ዳግም ክሪስታላይዜሽን የሚመጣውን ማንኛውንም ጉዳት ይቀንሱ

ናሙናዎችን ለማቅለጥ የውሃ መታጠቢያዎች፣ የዶቃ መታጠቢያዎች ወይም ልዩ አውቶማቲክ መሳሪያዎች በብዛት ጥቅም ላይ ይውላሉ።

ብዙ ጊዜ 1 ሴል መስመር በአንድ ጊዜ ለ1-2 ደቂቃ ይቀልጣል፣ በ37℃ የውሃ መታጠቢያ ውስጥ ቀስ ብሎ በማወዛወዝ በቫሊዩ ውስጥ ትንሽ የበረዶ ግግር እስኪያልቅ ድረስ ቀድሞ በሞቀ የእድገት መሃከል ውስጥ ከመታጠብዎ በፊት።

ለአንዳንድ ህዋሶች እንደ አጥቢ እንስሳት ሽሎች፣ ቀስ ብሎ ማሞቅ ለህይወታቸው አስፈላጊ ነው።

ሴሎቹ አሁን ለሴሎች ባህል፣ ሴል ማግለል ወይም ሄማቶፖይቲክ ስቴም ሴሎችን በተመለከተ ዝግጁ ናቸው - የማየሎአብላቲቭ ሕክምና ከመደረጉ በፊት የለጋሾችን ግንድ ሴሎች ታማኝነት ለማረጋገጥ አዋጭነት ጥናቶች።

በባህል ውስጥ ለመትከል የሕዋስ ውህዶችን ለመወሰን የሕዋስ ቆጠራን ለማካሄድ ጥቅም ላይ ከሚውለው ቀድሞ ከታጠበ ናሙና ውስጥ ትንሽ አሊኮት መውሰድ የተለመደ ነው። ከዚያ የሕዋስ ማግለል ሂደቶችን ውጤት መገምገም እና የሕዋስ አዋጭነትን መወሰን ይችላሉ።

የ Cryovials ማከማቻ ምርጥ ልምዶች

በክሪዮቪያል ውስጥ የተከማቹ ናሙናዎችን በተሳካ ሁኔታ ማቆየት በፕሮቶኮሉ ውስጥ ባሉ ብዙ አካላት ላይ የተመረኮዘ ሲሆን ይህም ትክክለኛውን ማከማቻ እና መዝገብ መያዝን ያካትታል።

• ሴሎችን በማጠራቀሚያ ቦታዎች መካከል ይከፋፍሉ- ጥራዞች የሚፈቅዱ ከሆነ ሴሎችን በጡጦዎች መካከል ይከፋፍሏቸው እና በመሳሪያዎች ብልሽት ምክንያት የናሙና መጥፋት አደጋን ለመቀነስ በተለየ ቦታ ያከማቹ።
• ተሻጋሪ ብክለትን ይከላከሉ– ከተከታይ ጥቅም በፊት ለአንድ ጊዜ ጥቅም ላይ የሚውል የጸዳ ክሪዮጅኒክ ጠርሙሶች ወይም አውቶክላቭን ይምረጡ
• ለሴሎችዎ ተገቢውን መጠን ያላቸውን ጠርሙሶች ይጠቀሙ- ጠርሙሶች በ1 እና 5mls መካከል ባሉ መጠኖች ውስጥ ይመጣሉ። የመሰባበር አደጋን ለመቀነስ ጠርሙሶችን ከመጠን በላይ ከመሙላት ይቆጠቡ።
• ከውስጥ ወይም ከውጪ በክር የተሰሩ ክሪዮጅኒክ ጠርሙሶችን ይምረጡ- ለደህንነት እርምጃዎች ከውስጥ የተጣበቁ ጠርሙሶች በአንዳንድ ዩኒቨርሲቲዎች ይመከራሉ - በተጨማሪም በሚሞሉበት ጊዜ ወይም በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ በሚከማቹበት ጊዜ ብክለትን መከላከል ይችላሉ።
• መፍሰስን መከላከል- መፍሰስን እና ብክለትን ለመከላከል ሁለት-የተከተቡ ማህተሞችን ወደ screw-cap ወይም O-rings የተሰሩ ማኅተሞችን ይጠቀሙ።
• 2D ባርኮዶችን ተጠቀም እና ጠርሙሶችን መለያ ስጥ- መፈለጊያውን ለማረጋገጥ ትላልቅ የጽህፈት ቦታዎች ያሉት ጠርሙሶች እያንዳንዱ ጠርሙ በቂ መለያ እንዲኖረው ያስችለዋል። 2D ባርኮዶች በማከማቻ አስተዳደር እና በመዝገብ አያያዝ ላይ ሊረዱ ይችላሉ። ባለቀለም ኮዶች በቀላሉ ለመለየት ጠቃሚ ናቸው።
• በቂ የማከማቻ ጥገና- ሴሎች እንዳይጠፉ ለማድረግ, የማጠራቀሚያ ዕቃዎች የሙቀት መጠንን እና የፈሳሽ ናይትሮጅን ደረጃዎችን በየጊዜው መከታተል አለባቸው. ተጠቃሚዎች ስህተቶችን ለማስጠንቀቅ ማንቂያዎች መታጠቅ አለባቸው።

የደህንነት ጥንቃቄዎች

በዘመናዊ ምርምር ውስጥ ፈሳሽ ናይትሮጅን የተለመደ ልምምድ ሆኗል ነገር ግን በተሳሳተ መንገድ ጥቅም ላይ ከዋለ ከባድ የአካል ጉዳት አደጋን ያመጣል.

ፈሳሽ ናይትሮጅን በሚጠቀሙበት ጊዜ የብርድ ፣የቃጠሎ እና ሌሎች አሉታዊ ክስተቶችን አደጋ ለመቀነስ ትክክለኛ የግል መከላከያ መሣሪያዎች (PPE) መልበስ አለባቸው። ይልበሱ

• ክሪዮጅኒክ ጓንቶች
• የላቦራቶሪ ካፖርት
• አንገትን የሚሸፍን ተጽእኖ የሚቋቋም ሙሉ የፊት መከላከያ
• የተዘጉ ጫማዎች
• የማይረጭ የፕላስቲክ መከለያ

የመተንፈስ አደጋን ለመቀነስ ፈሳሽ ናይትሮጅን ማቀዝቀዣዎች በደንብ አየር በሌለባቸው ቦታዎች መቀመጥ አለባቸው - ያመለጠ ናይትሮጅን ይተንታል እና የከባቢ አየር ኦክስጅንን ያስወግዳል. ትልቅ መጠን ያላቸው መደብሮች ዝቅተኛ የኦክስጂን ማንቂያ ስርዓቶች ሊኖራቸው ይገባል.

ፈሳሽ ናይትሮጅን በሚይዝበት ጊዜ ጥንድ ሆነው መሥራት በጣም ጥሩ ነው እና ከመደበኛ የስራ ሰዓት ውጭ መጠቀም የተከለከለ መሆን አለበት።

የስራ ፍሰትዎን የሚደግፉ ክሪዮቪሎች

Suzhou Ace ባዮሜዲካል ኩባንያ ለተለያዩ የሕዋስ ዓይነቶች የእርስዎን የክሪዮፕሴፕሽን ፍላጎቶች የሚያሟሉ ሰፊ ምርቶችን ያቀርባል። ፖርትፎሊዮው የተለያዩ ቱቦዎችን እንዲሁም የተለያዩ የጸዳ ክሪዮቪየሎችን ያካትታል።

የእኛ ክሪዮቪያሎች የሚከተሉት ናቸው

• የላብራቶሪ ስክሪፕ ካፕ 0.5ml 1.5ml 2.0ml Cryovial Cryogenic Vials Conical Bottom Cryotube ከ Gasket ጋር

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml ዝርዝር መግለጫ፣ከቀሚስ ወይም ያለ ቀሚስ
  ● ሾጣጣ ወይም ራሱን የቻለ ዲዛይን፣ የማይጸዳ ወይም የማይጸዳ ሁለቱም ይገኛሉ
  ● ስክራፕ ካፕ ቱቦዎች የሚሠሩት ከሕክምና ደረጃ ፖሊፕሮፒሊን ነው።
  ● ፒፒ ክሪዮቱብ ጠርሙሶች በተደጋጋሚ በረዶ ሊሆኑ እና ሊቀልጡ ይችላሉ።
  ●የውጭ ቆብ ንድፍ በናሙና ህክምና ወቅት የብክለት እድልን ሊቀንስ ይችላል።
  ● ካፕ ክሪዮጀንሲያዊ ቱቦዎች ሁለንተናዊ ጠመዝማዛ ክሮች ለመጠቀም
  ● ቱቦዎች በጣም የተለመዱ rotors ጋር ይስማማሉ
  ● ክሪዮጀኒክ ቲዩብ ኦ-ሪንግ ቱቦዎች ደረጃቸውን የጠበቁ 1 ኢንች እና 2-ኢንች፣ 48ዌል፣ 81ዌል፣ 96ዌል እና 100ዌል ፍሪዘር ሳጥኖች ተስማሚ ናቸው።
  ● አውቶማቲክ እስከ 121 ° ሴ እና በረዶ -86 ° ሴ

  ክፍል ቁጥር	ቁሳቁስ	ድምጽ	ካፕቀለም	PCS/ቦርሳ	ቦርሳዎች / መያዣ
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	ጥቁር ፣ ቢጫ ፣ ሰማያዊ ፣ ቀይ ፣ ሐምራዊ ፣ ነጭ	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5 ሚሊ	ጥቁር ፣ ቢጫ ፣ ሰማያዊ ፣ ቀይ ፣ ሐምራዊ ፣ ነጭ	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 ሚሊ	ጥቁር ፣ ቢጫ ፣ ሰማያዊ ፣ ቀይ ፣ ሐምራዊ ፣ ነጭ	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	ጥቁር ፣ ቢጫ ፣ ሰማያዊ ፣ ቀይ ፣ ሐምራዊ ፣ ነጭ	500	10