ኑክሊክ አሲድ ማውጣት እና መግነጢሳዊ ቢድ ዘዴ

መግቢያ

ኑክሊክ አሲድ ማውጣት ምንድነው?

በጣም ቀላል በሆነው የኒውክሊክ አሲድ ማውጣት አር ኤን ኤ እና/ወይም ዲ ኤን ኤ ከናሙና እና አላስፈላጊ የሆኑትን ሁሉ ማስወገድ ነው። የማውጣቱ ሂደት ኑክሊክ አሲዶችን ከናሙና በመለየት በተከማቸ ኤሉኤት መልክ ያፈራቸዋል፣ ከመርዛማ ንጥረ ነገሮች እና ከማንኛውም የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖች ላይ ተጽዕኖ ከሚያሳድሩ ተላላፊዎች የጸዳ።

የኒውክሊክ አሲድ የማውጣት መተግበሪያዎች

የተጣራ ኑክሊክ አሲዶች በበርካታ የተለያዩ ኢንዱስትሪዎች ውስጥ በተለያዩ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላሉ። ጤና አጠባበቅ ምናልባት ብዙ ጥቅም ላይ የሚውልበት አካባቢ ነው፣የተጣራ አር ኤን ኤ እና ዲኤንኤ ለተለያዩ የተለያዩ የምርመራ ዓላማዎች ያስፈልጋል።

በጤና እንክብካቤ ውስጥ የኑክሊክ አሲድ የማውጣት መተግበሪያዎች የሚከተሉትን ያካትታሉ:

- PCR እና qPCR ማጉላት

- የሚቀጥለው ትውልድ ቅደም ተከተል (NGS)

- በማጉላት ላይ የተመሰረተ SNP Genotyping

- ድርድር ላይ የተመሠረተ ጂኖታይፕ

- የኢንዛይም መፈጨትን መገደብ

- ማሻሻያ ኢንዛይሞችን (ለምሳሌ ሊጋሽን እና ክሎኒንግ) በመጠቀም ይመረምራል።

በአባትነት ምርመራ፣ በፎረንሲክስ እና በጂኖሚክስ ላይ ብቻ ያልተገደበ የኑክሊክ አሲድ ማውጣት ጥቅም ላይ የሚውልባቸው ከጤና እንክብካቤ ባሻገር ሌሎች መስኮችም አሉ።

የኒውክሊክ አሲድ የማውጣት አጭር ታሪክ

የዲኤንኤ ማውጣትበ1869 ፍሪድሪክ ሚሼር በተባለ ስዊዘርላንዳዊ ሐኪም የተደረገ ሲሆን ሚሼር የሕዋስ ኬሚካላዊ ስብጥርን በመወሰን የሕይወትን መሠረታዊ መርሆች ለመፍታት ተስፋ አድርጎ ነበር። ከሊምፎይቶች ጋር ካልተሳካ በኋላ በተጣሉ ፋሻዎች ላይ መግል ውስጥ ከሚገኙት ሉኪዮተስቶች የዲ ኤን ኤ ድፍድፍ ማግኘት ችሏል። ይህንንም ያደረገው አሲድ ከዚያም አልካላይን ወደ ሴል በመጨመር የሴሉ ሳይቶፕላዝም እንዲወጣ በማድረግ ዲ ኤን ኤውን ከሌሎቹ ፕሮቲኖች ለመለየት ፕሮቶኮል አዘጋጅቷል።

የሚሼርን መሬት ሰባሪ ምርምር ተከትሎ፣ ሌሎች በርካታ ሳይንቲስቶች ዲ ኤን ኤ ለመለየት እና ለማጣራት ቴክኒኮችን ቀድመው ቀጥለዋል። ኤድዊን ጆሴፍ ኮን፣ የፕሮቲን ሳይንቲስት በ WW2 ወቅት ፕሮቲን የማጥራት ብዙ ቴክኒኮችን አዳብሯል። በደም ፕላዝማ ውስጥ ያለውን የሴረም አልቡሚን ክፍልፋዮችን የመለየት ሃላፊነት ነበረው, ይህም በደም ሥሮች ውስጥ ያለውን የኦስሞቲክ ግፊትን ለመጠበቅ አስፈላጊ ነው. ይህም ወታደሮችን በህይወት ለማቆየት ወሳኝ ነበር.

እ.ኤ.አ. በ 1953 ፍራንሲስ ክሪክ ከሮሳሊንድ ፍራንክሊን እና ከጄምስ ዋትሰን ጋር በመሆን የዲኤንኤውን አወቃቀር ወሰኑ ፣ ይህም በሁለት የኑክሊክ አሲድ ኑክሊዮታይድ ረጅም ሰንሰለቶች የተሠራ መሆኑን ያሳያል ። በ1958 ባደረጉት ሙከራ ከፊል ወግ አጥባቂ የዲ ኤን ኤ መባዛትን በማሳየታቸው ይህ የድል ግኝት ሜሴልሰን እና ስታህል ዲኤንኤን ከኢ.ኮሊ ባክቴሪያ ለመለየት የ density gradient centrifugation ፕሮቶኮል ማዘጋጀት ለቻሉ መንገዱን ከፍቷል።

የኒውክሊክ አሲድ የማውጣት ዘዴዎች

የዲኤንኤ ማውጣት 4 ደረጃዎች ምንድ ናቸው?
ሁሉም የማውጫ ዘዴዎች ወደ ተመሳሳይ መሰረታዊ ደረጃዎች ይከፈላሉ.

የሕዋስ መቋረጥ. ይህ ደረጃ፣ ሴል ሊሲስ በመባልም የሚታወቀው፣ የፍላጎት ኒዩክሊክ አሲዶችን የያዙ ውስጠ-ህዋስ ፈሳሾችን ለመልቀቅ የሕዋስ ግድግዳውን እና/ወይም የሕዋስ ሽፋንን ማፍረስን ያጠቃልላል።

የማይፈለጉ ቆሻሻዎችን ማስወገድ. ይህ ሽፋን ሊፒድስን፣ ፕሮቲኖችን እና ሌሎች ያልተፈለጉ ኒዩክሊክ አሲዶችን ያጠቃልላል ይህም የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖችን ሊያስተጓጉል ይችላል።

ነጠላ። የፍላጎት ኒዩክሊክ አሲዶችን ከፈጠሩት የተጣራ ሊዛት ለመለየት ብዙ የተለያዩ መንገዶች አሉ ፣ እነዚህም በሁለት ዋና ምድቦች መካከል ይወድቃሉ-መፍትሄ ላይ የተመሠረተ ወይም ጠንካራ ሁኔታ (ቀጣዩን ክፍል ይመልከቱ)።

ትኩረት መስጠት. ኑክሊክ አሲዶች ከሁሉም ሌሎች ብከላዎች እና ፈሳሾች ከተገለሉ በኋላ በከፍተኛ ደረጃ በተጠናከረ ኢሊየም ውስጥ ይቀርባሉ.

ሁለቱ የማውጣት ዓይነቶች
ሁለት ዓይነት ኑክሊክ አሲድ ማውጣት አለ - መፍትሄ ላይ የተመሰረቱ ዘዴዎች እና ጠንካራ ሁኔታ ዘዴዎች። የመፍትሄው መሰረት ያለው ዘዴ ኬሚካላዊ የማውጣት ዘዴ በመባልም ይታወቃል፡ ምክንያቱም ኬሚካሎችን በመጠቀም ሴሉን ለማፍረስ እና ወደ ኒውክሊክ ቁስ መድረስን ያካትታል። ይህ እንደ ፌኖል እና ክሎሮፎርም ያሉ ኦርጋኒክ ውህዶችን ወይም አነስተኛውን ጎጂ እና እንደ ፕሮቲን ኬ ወይም ሲሊካ ጄል ያሉ በጣም የሚመከሩ ኢንኦርጋኒክ ውህዶችን መጠቀም ሊሆን ይችላል።

ሴሎችን ለመከፋፈል የተለያዩ የኬሚካል ማውጣት ዘዴዎች ምሳሌዎች የሚከተሉትን ያካትታሉ:

- የሽፋን ኦስሞቲክ መሰባበር

- የሕዋስ ግድግዳ ኢንዛይሞች መፈጨት

- የሽፋን መሟሟት

- ከእቃ ማጠቢያዎች ጋር

- ከአልካላይን ህክምና ጋር

ጠንካራ የስቴት ቴክኒኮች፣ እንዲሁም ሜካኒካል ዘዴዎች በመባልም የሚታወቁት፣ ዲ ኤን ኤ ከጠንካራ ንኡስ ክፍል ጋር እንዴት እንደሚገናኝ መበዝበዝን ያካትታል። ዲ ኤን ኤው የሚጣበቀውን ዶቃ ወይም ሞለኪውል በመምረጥ ተንታኙ ግን አይሰራም፣ ሁለቱን መለየት ይቻላል። ሲሊካ እና ማግኔቲክ ዶቃዎችን መጠቀምን ጨምሮ ጠንካራ-ደረጃ የማውጣት ቴክኒኮች ምሳሌዎች።

መግነጢሳዊ Bead Extraction ተብራርቷል።

መግነጢሳዊ ዶቃ የማውጣት ዘዴ
መግነጢሳዊ ዶቃዎችን በመጠቀም የማውጣት እድሉ ለመጀመሪያ ጊዜ የታወቀው በትሬቨር ሃውኪንስ ለዋይትሄድ ኢንስቲትዩት የምርምር ተቋም ባቀረበው የአሜሪካ የፓተንት ሰነድ ነው። ይህ የፈጠራ ባለቤትነት የጄኔቲክ ቁሳቁሶችን ከጠንካራ የድጋፍ ተሸካሚ ጋር በማገናኘት ማውጣት እንደሚቻል አምኗል ይህም ማግኔቲክ ዶቃ ሊሆን ይችላል. መርሆው የጄኔቲክ ቁሳቁሱ የሚታሰርበት በጣም የሚሰራ መግነጢሳዊ ዶቃን ትጠቀማለህ ከዚያም ናሙናውን በያዘው የመርከቧ ውጫዊ ክፍል ላይ መግነጢሳዊ ሃይልን በመተግበር ከሱፐርናታንት መለየት ይቻላል።

ለምን መግነጢሳዊ ዶቃ ኤክስትራክሽን ይጠቀሙ?
ፈጣን እና ቀልጣፋ የማውጣት ሂደቶችን በያዘው አቅም ምክንያት መግነጢሳዊ ዶቃ የማውጣት ቴክኖሎጂ ከጊዜ ወደ ጊዜ እየተስፋፋ ነው። በቅርብ ጊዜ ውስጥ በጣም የሚሰሩ መግነጢሳዊ ዶቃዎች ተስማሚ ቋት ሲስተም ያላቸው እድገቶች ታይተዋል፣ ይህም የኑክሊክ አሲድ መፈልፈያ አውቶማቲካሊ እንዲሆን እና የስራ ፍሰት በጣም ቀላል እና ወጪ ቆጣቢ ነው። እንዲሁም ማግኔቲክ ዶቃ የማውጣት ዘዴዎች ረጅም የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን የሚሰብሩ ሸለተ ኃይሎችን ሊያስከትሉ የሚችሉትን የሴንትሪፍግሽን እርምጃዎችን አያካትቱም። ይህ ማለት ረዘም ያለ የዲ ኤን ኤ ክሮች ሳይበላሹ ይቆያሉ, ይህም በጂኖሚክስ ምርመራ ውስጥ አስፈላጊ ነው.