ምንም እንኳን በንድፈ ሀሳብ፣ የአብነት ሞለኪውል አንድ ሞለኪውል በቂ ቢሆንም፣ እጅግ በጣም ብዙ መጠን ያለው ዲ ኤን ኤ በተለምዶ ለታወቀ PCR ጥቅም ላይ ይውላል፣ ለምሳሌ እስከ 1 µg የጂኖም አጥቢ እንስሳት ዲ ኤን ኤ እና እስከ 1 ፒጂ የፕላዝማዲ ዲኤንኤ። በጣም ጥሩው መጠን በአብዛኛው የተመካው በዒላማው ቅደም ተከተል ቅጂዎች ብዛት, እንዲሁም በውስብስብነቱ ላይ ነው.
በጣም ትንሽ አብነት ጥቅም ላይ ከዋለ፣ በቂ የሆነ የምርት መጠን ለማግኘት የማጉላት ዑደቶች ቁጥር መጨመር ያስፈልጋል። ለአብዛኛዎቹ PCR ሙከራዎች ጥቅም ላይ የሚውለው Taq polymerase የእርማት ተግባርን (3′-5′ exonuclease እንቅስቃሴ) አያሳይም። ስለዚህ በማጉላት ጊዜ የሚከሰቱ ስህተቶች ሊታረሙ አይችሉም. የዑደቶች ብዛት ከፍ ባለ መጠን የተበላሸ ምርትን ማጉላት የበለጠ የተስፋፋ ይሆናል። በአንፃሩ የአብነት መጠኑ በጣም ከፍተኛ ከሆነ የፕሪመር ፕሪመር ወደ ሌሎች ቅደም ተከተሎች (የመቶ በመቶ ማሟያ አይደለም) እንዲሁም የፕሪመር ዲመርስ መፈጠር እድሉ ይጨምራል, ይህ ደግሞ ማጉላትን ያስከትላል. ተረፈ ምርቶች. በብዙ አጋጣሚዎች፣ ዲ ኤን ኤ ከሴሎች ባህሎች ወይም ረቂቅ ተሕዋስያን ተለይቷል እና በመቀጠል እንደ PCR አብነት ጥቅም ላይ ይውላል። ከተጣራ በኋላ ለ PCR ማዋቀር የሚያስፈልገውን መጠን ለመወሰን የዲ ኤን ኤውን ትኩረት መወሰን አስፈላጊ ነው. Agarose gel electrophoresis ግምቱን ለማቅረብ ሊያገለግል ቢችልም, ይህ ዘዴ ከትክክለኛነት የራቀ ነው. UV-Vis spectrophotometry ኑክሊክ አሲዶችን ለመለካት እንደ ወርቅ ደረጃ ተቋቁሟል። ይህ ቀጥተኛ እና ቀላል እና ፈጣን ዘዴ የናሙናውን መጠን በ 260 nm ይለካል እና ትኩረትን በመቀየሪያ ምክንያት ይሰላል።
የዲኤንኤ ትኩረት በጣም ዝቅተኛ ከሆነ ግን (<1 µg/ml dsDNA) ወይም ደግሞ በ260 nm ክልል ውስጥ በሚወስዱ ንጥረ ነገሮች የተበከለ ከሆነ (ለምሳሌ አር ኤን ኤ፣ ፕሮቲን፣ ጨዎችን) ይህ ዘዴ ውሱን ይደርሳል። በጣም ዝቅተኛ ትኩረትን በሚመለከት፣ ንባቦቹ ብዙም ሳይቆይ ጥቅም ላይ እንዳይውሉ በጣም የተሳሳቱ ይሆናሉ፣ እና ብክለቶች (አንዳንዴም በጣም ትልቅ) የእውነተኛውን ዋጋ ከመጠን በላይ ግምትን ያስከትላሉ። በዚህ ሁኔታ, fluorescenceን በመጠቀም መጠናቸው አንድ አማራጭ ሊያቀርብ ይችላል. ይህ ዘዴ በተለይ ከዲኤስዲኤንኤ ጋር የሚያገናኘው የፍሎረሰንት ቀለም አጠቃቀም ላይ የተመሰረተው ውስብስብ ኑክሊክ አሲድ እና ቀለም ብቻ በብርሃን ይደሰታል እና ከዚያም ትንሽ ከፍ ያለ የሞገድ ርዝመት ብርሃን ይፈጥራል። እዚህ, የፍሎረሰንት ምልክት ጥንካሬ ከዲ ኤን ኤ መጠን ጋር ተመጣጣኝ ነው, እና ትኩረቱን ለመወሰን ከመደበኛ ኩርባ ጋር ይገመገማል. የዚህ ዘዴ ጠቀሜታዎች በብክለት ምክንያት የሚመጡትን የውጭ ተጽእኖዎች በማያካትት ትስስር ላይ ባለው ልዩነት ላይ እና እንዲሁም በጣም ዝቅተኛ የዲ ኤን ኤ ስብስቦችን የመለየት ችሎታ ላይ ያርፋሉ. የሁለቱም ዘዴዎች ተስማሚነት በዋናነት በናሙና ትኩረት እና ንፅህና ላይ የተመሰረተ ነው; በብዙ አጋጣሚዎች ሁለቱንም ዘዴዎች በትይዩ መተግበሩ ጠቃሚ ሊሆን ይችላል.
የልጥፍ ሰዓት፡- ህዳር-30-2022