Vir suksesvolle amplifikasiereaksies is dit nodig dat die individuele reaksiekomponente in die korrekte konsentrasie in elke voorbereiding teenwoordig is. Daarbenewens is dit belangrik dat geen kontaminasie plaasvind nie.
Veral wanneer baie reaksies opgestel moet word, is daar vasgestel om 'n sogenaamde meestermengsel voor te berei in plaas daarvan om elke reagens afsonderlik in elke houer te pipet. Vooraf gekonfigureerde mengsels is kommersieel beskikbaar, waarin slegs monsterspesifieke komponente (onderlaag) en water bygevoeg word. Alternatiewelik kan die meestermengsel self voorberei word. In beide variante word die mengsel na elke PCR-vat versprei sonder 'n sjabloon en die individuele DNS-monster word afsonderlik aan die einde bygevoeg.
Die gebruik van 'n meestermengsel hou verskeie voordele in: Eerstens word die aantal enkelpipeteringsstappe verminder. Sodoende word beide die risiko van gebruikersfoute tydens pipettering en die risiko van kontaminasie tot die minimum beperk en word natuurlik tyd bespaar. In beginsel is die pipeteringsakkuraatheid ook hoër, aangesien groter volumes gedoseer word. Dit is maklik om te verstaan wanneer die tegniese data van pipette nagegaan word: Hoe kleiner die gedoseerde volume, hoe groter kan die afwykings wees. Die feit dat alle preparate uit dieselfde houer kom, het 'n positiewe uitwerking op homogeniteit (indien goed gemeng). Dit verbeter ook die reproduceerbaarheid van die eksperimente.
Wanneer die hoofmengsel voorberei word, moet ten minste 10 % ekstra volume bygevoeg word (bv. indien 10 voorbereidings benodig word, bereken op grond van 11), sodat selfs die laaste houer behoorlik gevul word. Op hierdie manier kan (geringe) pipeteringsonakkuraathede, en die effek van monsterverlies by die dosering van skoonmaakmiddelbevattende oplossings vergoed word. Skoonmaakmiddels is vervat in ensiemoplossings soos polimerases en meestermengsels, wat skuimvorming en residue op die binneoppervlak van normaal veroorsaakpipetpunte.
Afhangende van die toediening en die tipe vloeistof wat gedoseer moet word, moet die korrekte pipettegniek (1) gekies word en die toepaslike toerusting gekies word. Vir oplossings wat skoonmaakmiddels bevat, word 'n direkte verplasingstelsel of die sogenaamde "lae retensie" pipetpunte as alternatief vir lugkussingspipette aanbeveel. Die effek vanACE PIPET wenkis gebaseer op 'n besonder hidrofobiese oppervlak. Vloeistowwe wat skoonmaakmiddels bevat, laat nie 'n oorblyfselfilm aan die binne- en buitekant nie, sodat die verlies aan oplossing tot die minimum beperk kan word.
Benewens die presiese dosering van alle komponente, is dit ook belangrik dat geen kontaminasie van die preparate plaasvind nie. Dit is nie voldoende om verbruiksgoedere van hoë suiwerheid te gebruik nie, want die pipetproses in 'n lugkussingspipet kan aërosols produseer wat in die pipet agterbly. Die DNS wat moontlik in die aërosol voorkom, kan in die volgende pipeteringsstap van een monster na die volgende oorgedra word en sodoende tot kontaminasie lei. Die direkte verplasingstelsels wat hierbo genoem word, kan ook hierdie risiko minimaliseer. Vir lugkussingspipette is dit sinvol om filterpunte te gebruik om die pipetkegel te beskerm deur spatsels, aërosols en biomolekules te behou.
Postyd: Des-06-2022