Kryovialeword algemeen gebruik vir die kryogeniese berging van sellyne en ander kritieke biologiese materiale, in dewars gevul met vloeibare stikstof.

Daar is verskeie stadiums betrokke by die suksesvolle bewaring van selle in vloeibare stikstof. Terwyl die basiese beginsel 'n stadige vries is, hang die presiese tegniek wat gebruik word af van die seltipe en kriobeskermer wat gebruik word. Daar is verskeie veiligheidsoorwegings en beste praktyke om in ag te neem wanneer selle by sulke lae temperature gestoor word.

Hierdie pos het ten doel om 'n oorsig te gee van hoe cryovials in vloeibare stikstof geberg word.

Wat is Cryovials

Cryovials is klein, bedekte flessies wat ontwerp is vir die berging van vloeibare monsters by uiters lae temperature. Hulle verseker dat selle wat in kriobeskermingsmiddel bewaar word nie in direkte kontak met die vloeibare stikstof kom nie, wat die risiko van sellulêre frakture tot die minimum beperk terwyl hulle steeds baat vind by die uiterste verkoelende effek van vloeibare stikstof.

Die flessies is gewoonlik beskikbaar in 'n reeks volumes en ontwerpe - hulle kan intern of ekstern met plat of geronde bodems geskroef word. Steriele en nie-steriele formate is ook beskikbaar.

Wie gebruikCyrovialsom selle in vloeibare stikstof te stoor

'n Verskeidenheid NHS en private laboratoriums, sowel as navorsingsinstellings wat spesialiseer in naelstringbloedbankdienste, epiteelselbiologie, immunologie en stamselbiologie, gebruik kriovials om selle te kryopreserveer.

Selle wat op hierdie manier bewaar word, sluit in B- en T-selle, CHO-selle, hematopoëtiese stam- en stamvaderselle, hibridomas, dermselle, makrofage, mesenchimale stam- en stamvaderselle, monosiete, myeloom, NK-selle en pluripotente stamselle.

Oorsig van hoe om cryovials in vloeibare stikstof te stoor

Kriopreservering is 'n proses wat selle en ander biologiese konstrukte bewaar deur hulle af te koel tot baie lae temperature. Selle kan jare lank in vloeibare stikstof gestoor word sonder verlies van sellewensvatbaarheid. Dit is 'n uiteensetting van die prosedures wat gebruik word.

Sel Voorbereiding

Die presiese metode vir die voorbereiding van monsters sal wissel na gelang van die seltipe, maar oor die algemeen word die selle versamel en gesentrifugeer om 'n selryke korrel te ontwikkel. Hierdie korrel word dan hersuspendeer in die supernatant gemeng met kriobeskermingsmiddel of 'n kriopreserveringsmedium.

Kriopreserveermedium

Hierdie medium word aangewend om selle te bewaar in die lae-temperatuur omgewings waaraan hulle onderwerp sal word deur die vorming van intra- en ekstrasellulêre kristalle en dus seldood te inhibeer. Hul rol is om 'n veilige, beskermende omgewing vir selle en weefsels te verskaf tydens die vries-, bergings- en ontdooiingsprosesse.

’n Medium soos vars bevrore plasma (FFP), gehepariniseerde plasmalietoplossing of serumvrye, dierekomponentvrye oplossings word gemeng met kriobeskermende middels soos dimetielsulfoksied (DMSO) of gliserol.

Die hervervloeide monsterkorrel word in polipropileen-kriofials verdeel, soos bvSuzhou Ace Biomediese maatskappy Cryogenic Storage Vials.

Dit is belangrik om nie die cryovials te vol te maak nie, aangesien dit die risiko van krake en die moontlike vrystelling van inhoud sal verhoog (1).

Beheerde vriestempo

Oor die algemeen word 'n stadige beheerde vriestempo aangewend vir die suksesvolle kriopreservering van selle.

Nadat monsters in kriogeniese flessies verdeel is, word dit op nat ys of in 'n 4℃ yskas geplaas en die vriesprosedure word binne 5 minute begin. As 'n algemene riglyn word selle afgekoel teen 'n tempo van -1 tot -3 per minuut (2). Dit word bereik met behulp van 'n programmeerbare verkoeler of deur flessies in 'n geïsoleerde boks te plaas wat in 'n –70°C tot –90°C beheerde snelheid vrieskas geplaas is.

Oordrag na vloeibare stikstof

Die bevrore kryogeniese flessies word dan vir onbepaalde tydperke na 'n vloeibare stikstoftenk oorgeplaas mits 'n temperatuur van minder as -135 ℃ gehandhaaf word.

Hierdie ultra-lae temperature kan verkry word deur onderdompeling in die vloeibare of dampfase stikstof.

Vloeistof- of dampfase?

Dit is bekend dat berging in vloeibare fase stikstof die koue temperatuur met absolute konsekwentheid handhaaf, maar word om die volgende redes dikwels nie aanbeveel nie:

• Die behoefte aan groot volumes (diepte) vloeibare stikstof wat 'n potensiële gevaar is. Brandwonde of versmoring as gevolg hiervan is 'n werklike risiko.
• Gedokumenteerde gevalle van kruiskontaminasie deur aansteeklike middels soos aspergillus, hep B en virale verspreiding via die vloeibare stikstofmedium (2,3)
• Die potensiaal dat vloeibare stikstof in die flessies kan lek tydens onderdompeling. Wanneer dit uit stoor verwyder word en tot kamertemperatuur verhit word, brei die stikstof vinnig uit. Gevolglik kan die flessie verpletter wanneer dit uit vloeibare stikstofberging verwyder word, wat 'n gevaar skep van beide vlieënde puin en blootstelling aan die inhoud (1, 4).

Om hierdie redes, is ultra-lae temperatuur berging mees algemeen in dampfase stikstof. Wanneer monsters in die vloeistoffase gestoor moet word, moet gespesialiseerde cryoflex buise gebruik word.

Die nadeel van die dampfase is dat 'n vertikale temperatuurgradiënt kan voorkom wat temperatuurskommelings tussen -135℃ en -190℃ tot gevolg het. Dit noodsaak noukeurige en noukeurige monitering van die vloeibare stikstofvlakke en temperatuurvariasies (5).

Baie vervaardigers beveel aan dat cryovials geskik is vir berging tot -135 ℃ of slegs vir gebruik in die dampfase.

Ontdooi jou cryopreserveerde selle

Die ontdooiingsprosedure is stresvol vir 'n bevrore kultuur, en behoorlike hantering en tegniek word vereis om optimale lewensvatbaarheid, herstel en funksionaliteit van die selle te verseker. Die presiese ontdooi-protokolle sal afhang van spesifieke seltipes. Vinnige ontdooiing word egter as standaard beskou vir:

• Verminder enige impak op sellulêre herstel
• Help om die blootstellingstyd aan die opgeloste stowwe wat in die vriesmedia teenwoordig is, te verminder
• Verminder enige skade deur ysherkristallisasie

Waterbaddens, kralebaddens of gespesialiseerde outomatiese instrumente word algemeen gebruik om monsters te ontdooi.

Meestal word 1 sellyn op 'n slag vir 1-2 minute ontdooi deur liggies in 'n 37℃ waterbad te draai totdat daar net 'n klein bietjie ys in die flessie oor is voordat dit in 'n voorafverwarmde groeimedium gewas word.

Vir sommige selle soos soogdierembrio's is stadige opwarming noodsaaklik vir hul oorlewing.

Die selle is nou gereed vir selkultuur, selisolasie, of in die geval van hematopoietiese stamselle – lewensvatbaarheidstudies om die integriteit van die skenkerstamselle voor myeloablatiewe terapie te waarborg.

Dit is normale praktyk om klein hoeveelhede van die voorafgewaste monster te neem wat gebruik word om 'n seltelling uit te voer om selkonsentrasies te bepaal vir uitplating in kultuur. Jy kan dan die resultate van sel-isolasieprosedures assesseer en sellewensvatbaarheid bepaal.

Beste praktyke vir die berging van cryovials

Die suksesvolle kriopreservering van monsters wat in kriovials gestoor word, hang af van baie elemente in die protokol, insluitend behoorlike berging en rekordhouding.

• Verdeel selle tussen stoorplekke– Indien volumes dit toelaat, verdeel selle tussen flessies en berg dit op aparte plekke om die risiko van monsterverlies weens toerustingfoute te verminder.
• Voorkom kruisbesmetting– Kies vir eenmalige steriele kriogene flessies of outoklaaf voor daaropvolgende gebruik
• Gebruik flessies van die regte grootte vir jou selle– flessies kom in 'n reeks volumes tussen 1 en 5 ml. Vermy om flessies te oorvul om die risiko van krake te verminder.
• Kies interne of eksterne skroefdraad kriogene flessies– Flessies met inwendige skroefdraad word deur sommige universiteite aanbeveel vir veiligheidsmaatreëls – dit kan ook kontaminasie voorkom tydens vul of wanneer dit in die vloeibare stikstof geberg word.
• Voorkom lekkasie- Gebruik twee-geïnspuitte seëls wat in die skroefdop of O-ringe gegiet is om lekkasie en kontaminasie te voorkom.
• Gebruik 2D strepieskodes en etikette flessies– om naspeurbaarheid te verseker, kan flessies met groot skryfareas elke fles voldoende geëtiketteer word. 2D-strepieskodes kan help met bergingbestuur en rekordhouding. Kleurgekodeerde pette is nuttig vir makliker identifikasie.
• Voldoende stoor instandhouding- Om te verseker dat selle nie verlore gaan nie, moet stoorhouers voortdurend die temperatuur en vloeibare stikstofvlakke monitor. Alarms moet aangebring word om gebruikers van foute te waarsku.

Veiligheidsmaatreëls

Vloeibare stikstof het algemene praktyk in moderne navorsing geword, maar hou die risiko van ernstige besering in as dit verkeerd gebruik word.

Behoorlike persoonlike beskermende toerusting (PPE) moet gedra word om die risiko van bevriesing, brandwonde en ander nadelige insidente te verminder wanneer vloeibare stikstof hanteer word. Dra

• Kryogeniese handskoene
• Laboratoriumjas
• Slagbestande vol gesigskerm wat ook die nek bedek
• Toe-toon skoene
• Spatvaste plastiek voorskoot

Vloeibare stikstof-yskaste moet in goed geventileerde areas geplaas word om die risiko van versmoring te verminder – ontsnapte stikstof verdamp en verdring atmosferiese suurstof. Groot volume winkels moet lae suurstof alarmstelsels hê.

Om in pare te werk wanneer vloeibare stikstof hanteer word, is ideaal en die gebruik daarvan buite normale werksure moet verbied word.

Cryovials om jou werkvloei te ondersteun

Suzhou Ace Biomedical-maatskappy bied 'n wye verskeidenheid produkte wat aan u kriobewaringsbehoeftes vir verskillende soorte selle voldoen. Die portefeulje sluit 'n reeks buise sowel as 'n reeks steriele cryovials in.

Ons cryovials is:

• Laboratorium-skroefdop 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml Kryoviale Kryogeniese flessies Koniese onderkant Kriobuis met pakking

  ● 0,5 ml, 1,5 ml, 2,0 ml spesifikasie, met romp of sonder romp
  ● Koniese of selfstaande ontwerp, steriel of nie-steriel, is albei beskikbaar
  ● Skroefdopbuise word van mediese graad polipropileen gemaak
  ● PP Kryobuisflessies kan herhaaldelik gevries en ontdooi word
  ●Die eksterne dopontwerp kan die kontaminasiewaarskynlikheid verminder tydens monsterbehandeling.
  ● Skroefdop kryogeniese buise Universele skroefdrade vir gebruik
  ● Buise pas by die meeste algemene rotors
  ● Kryogeniese buis-o-ringbuise pas by standaard 1-duim en 2-duim, 48-put, 81-put, 96-put en 100-put vrieskas bokse
  ● Outoklaveerbaar tot 121°C en vriesbaar tot -86°C

  DEEL NR	MATERIAAL	VOLUME	CAPKLEUR	PCS/SAK	SAKKE/KOSIE
  WET05-BL-N	PP	0,5 ml	Swart, Geel, Blou, Rooi, Pers, Wit	500	10
  WET15-BL-N	PP	1,5 ml	Swart, Geel, Blou, Rooi, Pers, Wit	500	10
  WET15-BL-NW	PP	1,5 ml	Swart, Geel, Blou, Rooi, Pers, Wit	500	10
  WET20-BL-N	PP	2.0ml	Swart, Geel, Blou, Rooi, Pers, Wit	500	10