Cryovialsword gereeld gebruik vir die kryogene opberging van sellyne en ander kritiese biologiese materiale, in dewars gevul met vloeibare stikstof.

Daar is verskillende fases betrokke by die suksesvolle behoud van selle in vloeibare stikstof. Alhoewel die basiese beginsel 'n stadige vriespunt is, hang die presiese tegniek wat gebruik word, afhang van die seltipe en die gebruikte van die cryoprotectant. Daar is verskillende veiligheidsoorwegings en beste praktyke wat u in ag moet neem by die opberging van selle by sulke lae temperature.

Hierdie pos het ten doel om 'n oorsig te gee van hoe cryovials in vloeibare stikstof geberg word.

Wat is cryovials

Cryovials is klein, bedekte flessies wat ontwerp is vir die stoor van vloeibare monsters by buitengewone lae temperature. Hulle verseker dat selle wat in kryoprotektant bewaar word, nie direk met die vloeibare stikstof in kontak kom nie, wat die risiko van sellulêre frakture tot die minimum beperk, terwyl dit steeds baat vind by die uiterste verkoelingseffek van vloeibare stikstof.

Die flessies is gewoonlik beskikbaar in 'n verskeidenheid volumes en ontwerpe - dit kan intern of ekstern met plat of afgeronde bodems geskroef word. Steriele en nie-steriele formate is ook beskikbaar.

Wie gebruikCyrovialsom selle in vloeibare stikstof te stoor

'N Reeks NHS en private laboratoriums, sowel as navorsingsinstellings wat spesialiseer in koordbloedbankdienste, epiteelselbiologie, immunologie en stamselbiologie, gebruik cryovials vir kryopreserwe -selle.

Selle wat op hierdie manier bewaar is, sluit in B- en T -selle, CHO -selle, hematopoietiese stam- en voorvader -selle, hibridome, dermselle, makrofage, mesenchymale stam- en voorvader -selle, monosiete, myeloom, NK -selle en pluripotente STEM -selle.

Oorsig van hoe om cryovials in vloeibare stikstof te stoor

Cryopreservering is 'n proses wat selle en ander biologiese konstrukte bewaar deur dit tot baie lae temperature af te koel. Selle kan jare lank in vloeibare stikstof gestoor word sonder om die lewensvatbaarheid van die selle te verlies. Dit is 'n uiteensetting van die prosedures wat gebruik word.

Selvoorbereiding

Die presiese metode vir die voorbereiding van monsters sal afhang van die seltipe, maar in die algemeen word die selle versamel en gesentrifugeer om 'n selryke korrel te ontwikkel. Hierdie korrel word dan weer gesuspendeer in die supernatant gemeng met cryoprotectant of 'n kryopreserveringsmedium.

Cryopreservation Medium

Hierdie medium word gebruik om selle te bewaar in die lae temperatuuromgewings waaraan hulle onderwerp sal word deur die vorming van intra- en ekstrasellulêre kristalle en dus seldood te belemmer. Hulle rol is om 'n veilige, beskermende omgewing vir selle en weefsels te bied tydens die vries-, opberg- en ontdooiingsprosesse.

'N Medium soos vars bevrore plasma (FFP), hepariniseerde plasmalietoplossing of serumvrye, diere-komponentvrye oplossings word gemeng met kryoprotektante soos dimetielsulfoksied (DMSO) of glycerol.

Die her-liquified monsterkorrel word in polipropileen cryovials soosSuzhou ace biomedical company cryogenic stoor flessies.

Dit is belangrik om nie die cryovials te oorvul nie, aangesien dit die risiko van krake en die moontlike vrystelling van die inhoud (1) sal verhoog.

Beheerde vrieskoers

Oor die algemeen word 'n stadig gekontroleerde vrieskoers gebruik vir die suksesvolle cryopreservering van selle.

Nadat monsters in kryogene flessies geplak is, word dit op nat ys of in 'n yskas van 4 ℃ geplaas en die vriesprosedure word binne 5 minute begin. As 'n algemene gids word selle afgekoel teen 'n tempo van -1 tot -3 per minuut (2). Dit word bewerkstellig met behulp van 'n programmeerbare koeler of deur flessies in 'n geïsoleerde boks wat in 'n –70 ° C tot –90 ° C gekontroleerde tempo -vrieskas geplaas is, te plaas.

Oordrag na vloeibare stikstof

Die bevrore kryogene flessies word dan vir onbepaalde periodes na 'n vloeibare stikstoftenk oorgedra, wat 'n temperatuur van minder as -135 ℃ gehandhaaf word.

Hierdie ultra-lae temperature kan verkry word deur onderdompeling in die vloeistof- of dampfase stikstof.

Vloeistof- of dampfase?

Dit is bekend dat berging in vloeistoffase stikstof die koue temperatuur met absolute konsekwentheid handhaaf, maar word dikwels om die volgende redes nie aanbeveel nie:

• Die behoefte aan groot volumes (diepte) vloeibare stikstof, wat 'n moontlike gevaar is. Brandwonde of versmoring as gevolg hiervan is 'n werklike risiko.
• Gedokumenteerde gevalle van kruiskontaminasie deur aansteeklike middels soos Aspergillus, HEP B en virale verspreiding via die vloeibare stikstofmedium (2,3)
• Die potensiaal vir vloeibare stikstof om tydens onderdompeling in die flessies te lek. As dit uit die opberging verwyder word en tot kamertemperatuur verhit word, brei die stikstof vinnig uit. Gevolglik kan die flessie verpletter word as dit uit vloeibare stikstofopberging verwyder word, wat 'n gevaar skep van vlieënde puin en blootstelling aan die inhoud (1, 4).

Om hierdie redes kom ultra-lae temperatuurberging meestal in dampfase stikstof. As monsters in die vloeistoffase gestoor moet word, moet gespesialiseerde cryoflex -buise gebruik word.

Die nadeel van die dampfase is dat 'n vertikale temperatuurgradiënt kan voorkom, wat lei tot temperatuurskommelings tussen -135 ℃ en -190 ℃. Dit noodsaak noukeurige en ywerige monitering van die vloeibare stikstofvlakke en temperatuurvariasies (5).

Baie vervaardigers beveel aan dat cryovials geskik is vir die berging tot -135 ℃ of slegs vir gebruik in die dampfase.

Ontdooi u kryopreservate selle

Die ontdooiingsprosedure is stresvol vir 'n bevrore kultuur, en die regte hantering en tegniek is nodig om optimale lewensvatbaarheid, herstel en funksionaliteit van die selle te verseker. Die presiese ontdooiingsprotokolle sal afhang van spesifieke seltipes. Vinnige ontdooiing word egter as standaard beskou as:

• Verminder die impak op sellulêre herstel
• Help om die blootstellingstyd te verminder tot die opgeloste stowwe wat in die vriesmedia aanwesig is
• Minimaliseer enige skade deur ICE -herkristallisasie

Waterbaddens, kraalbaddens of gespesialiseerde outomatiese instrumente word gereeld gebruik om monsters te ontdooi.

Dikwels word 1 sellyn op 'n slag vir 1-2 minute ontdooi deur saggies in 'n 37 ℃ waterbad te draai totdat daar net 'n klein bietjie ys in die flacon oor is voordat dit in 'n voorgewapte groeimedium gewas word.

Vir sommige selle soos soogdierembrio's is stadige opwarming noodsaaklik vir hul oorlewing.

Die selle is nou gereed vir selkultuur, selisolasie of in die geval van hematopoietiese stamselle - lewensvatbaarheidstudies om die integriteit van die skenker -stamselle voor myeloablatiewe terapie te waarborg.

Dit is 'n normale praktyk om klein hoeveelhede van die voorgeskrewe monster te neem wat gebruik word om 'n seltelling uit te voer om die selkonsentrasies te bepaal om in die kultuur te plaas. U kan dan die resultate van selisolasieprosedures beoordeel en die lewensvatbaarheid van die selle bepaal.

Beste praktyke vir die berging van cryovials

Die suksesvolle cryopreservering van monsters wat in cryovials gestoor is, hang af van baie elemente in die protokol, insluitend behoorlike berging en rekordhouding.

• Gesplete selle tussen stoorplekke- As volumes dit toelaat, verdeel selle tussen flessies en stoor dit op aparte plekke om die risiko van monsterverlies te verminder as gevolg van toerustingfoute.
• Voorkom kruisbesmetting-Kies vir steriele kryogene flessies of outoklaaf voor die daaropvolgende gebruik van enkelgebruik
• Gebruik toepaslike grootte flessies vir u selle- flessies kom in 'n verskeidenheid volumes tussen 1 en 5 ml. Vermy die oorvul van flessies om die risiko van krake te verminder.
• Kies interne of eksterne geskrewe kryogene flessies- Intern -draad -flessies word deur sommige universiteite aanbeveel vir veiligheidsmaatreëls - dit kan ook besoedeling voorkom tydens vulling of as dit in die vloeibare stikstof geberg word.
• Voorkom lekkasie-Gebruik BIB-ingespuitde seëls wat in die skroefdop of O-ringe gevorm is om te voorkom dat lekkasie en besmetting voorkom.
• Gebruik 2D -strepieskodes en etiketflessies- Om naspeurbaarheid te verseker, stel flessies met groot skryfareas elke flacon voldoende gemerk. 2D -strepieskodes kan help met bergingsbestuur en rekordhouding. Kleurgekodeerde doppe is nuttig vir makliker identifikasie.
• Voldoende opberginstandhouding- Om te verseker dat selle nie verlore gaan nie, moet opbergvate voortdurend die temperatuur en vloeibare stikstofvlakke monitor. Alarms moet aangebring word om gebruikers van foute te waarsku.

Veiligheidsmaatreëls

Vloeibare stikstof het algemeen geword in moderne navorsing, maar hou die risiko van ernstige beserings in as dit verkeerd gebruik word.

Behoorlike persoonlike beskermende toerusting (PPE) moet gedra word om die risiko van rypskade, brandwonde en ander nadelige voorvalle te verminder by die hantering van vloeibare stikstof. Dra

• Kryogene handskoene
• Laboratoriumjas
• Impakbestande volledige gesigskerm wat ook die nek bedek
• Geslote tone skoene
• Spatvaste plastiekvoorskoot

Vloeibare stikstof-yskaste moet in goed geventileerde gebiede geplaas word om die risiko van versmoring te verminder-ontsnapte stikstof verdamp en verplaas die atmosferiese suurstof. Groot volume winkels moet lae suurstofalarmsisteme hê.

Dit is ideaal om in pare te werk by die hantering van vloeibare stikstof en die gebruik daarvan buite normale werksure moet verbied word.

Cryovials om u werkvloei te ondersteun

Suzhou Ace Biomedical Company bied 'n wye verskeidenheid produkte aan wat aan u kryopreseringsbehoeftes vir verskillende soorte selle voldoen. Die portefeulje bevat 'n reeks buise, sowel as 'n reeks steriele cryovials.

Ons cryovials is:

• Laboratoriumskroefdop 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml cryovial cryogenic flessies Koniese onderste kryotube met pakking

  ● 0,5 ml, 1,5 ml, 2,0 ml spesifikasie, met romp of sonder romp
  ● Koniese of selfstandige ontwerp, steriel of nie-steriel is albei beskikbaar
  ● Skroefdopbuise is gemaak van mediese graad polipropileen
  ● PP -kryotube -flessies kan herhaaldelik gevries en ontdooi word
  ● Die eksterne CAP -ontwerp kan die waarskynlikheid van besoedeling tydens monsterbehandeling verminder.
  ● Skroefdop kryogene buise universele skroefdrade vir gebruik
  ● Buise pas die meeste gewone rotors
  ● Kryogene buis O-ringbuise pas standaard 1-inch en 2-duim, 48well, 81well ， 96well en 100well vrieskaste
  ● Outoklaafbaar tot 121 ° C en vriesbaar tot -86 ° C

  Deel nr	Materiaal	Volume	KapKleur	PCS/Sak	Sakke/saak
  Act05-Bl-N	PP	0,5 ml	Swart, geel, blou, rooi, pers, wit	500	10
  Act15-Bl-N	PP	1,5 ml	Swart, geel, blou, rooi, pers, wit	500	10
  Act15-BL-NW	PP	1,5 ml	Swart, geel, blou, rooi, pers, wit	500	10
  Act20-Bl-N	PP	2.0ml	Swart, geel, blou, rooi, pers, wit	500	10