Die standaardisering van prosesse sluit hul optimalisering en daaropvolgende vestiging en harmonisering in, wat langtermyn optimale prestasie moontlik maak-onafhanklik van die gebruiker. Standaardisering verseker resultate van hoë gehalte, sowel as die reproduceerbaarheid en vergelykbaarheid daarvan.
Die doel van (klassieke) PCR is die opwekking van 'n betroubare en reproduceerbare resultaat. Vir sekere toepassings is die opbrengs van diePCR -produkis ook relevant. Vir hierdie reaksies moet sorg gedra word om te verseker dat monsters nie in die gedrang kom nie en dat die PCR -werkvloei stabiel bly. Spesifiek, dit lei tot die minimalisering van die bekendstelling van kontaminasies wat kan lei tot vals positiewe of vals negatiewe resultate of selfs die PCR -reaksie kan belemmer. Verder moet die reaksietoestande so identies as moontlik wees vir elke individuele monster binne 'n lopie en ook oorgedra kan word na daaropvolgende reaksies (van dieselfde metode). Dit verwys na die samestelling van die reaksies sowel as die tipe temperatuurbeheer in die siklus. Gebruikersfoute moet natuurlik soveel as moontlik vermy word.
Hieronder sal ons die uitdagings demonstreer wat tydens die voorbereiding en gedurende die loop van 'n PCR ondervind word - en die benaderings tot oplossings wat bestaan ten opsigte van instrumente en verbruiksgoedere wat gebruik word vir die standaardisering van die PCR -werkvloei.
Reaksievoorbereiding
Die reseptering van reaksiekomponente in onderskeidelik PCR-vesels, of plate, bestaan uit verskeie uitdagings wat oorkom moet word:
Reaksietoestande
Die presiese en presiese dosering van die individuele komponente is onontbeerlik as u mik vir die mees identiese reaksietoestande. Benewens 'n goeie pipettegniek, is dit van kritieke belang om die regte werktuig te kies. PCR-meestermengsels bevat gereeld stowwe wat die viskositeit verhoog of skuim genereer. Tydens die pipetproses lei dit tot aansienlike benatting van diePipette wenke, sodoende die vermindering van die akkuraatheid van die pipet. Die gebruik van direkte resepteringstelsels of alternatiewe pipetwenke wat minder geneig is tot benatting, kan die akkuraatheid en akkuraatheid van die pipetproses verbeter.
Besoedeling
Tydens die resepteringsproses word aërosols gegenereer wat, indien dit toegelaat word om die binnekant van die pipet te bereik, moontlik 'n ander monster kan besoedel tydens die volgende pipetstap. Dit kan voorkom word deur filterwenke of direkte verplasingstelsels te gebruik.
Verbruiksgoedere soospunte, Vaartuie en plate wat in die PCR -werkvloei gebruik word, mag nie stowwe bevat wat die monster in die gedrang bring of die resultaat vervals nie. Dit sluit in DNA, DNases, RNases en PCR -remmers, sowel as komponente wat moontlik tydens die reaksie van die materiaal kan loog - stowwe wat bekend staan as loogbare produkte.
Gebruikersfout
Hoe meer monsters verwerk word, hoe hoër is die foutrisiko. Dit kan maklik gebeur dat 'n monster in die verkeerde vaartuig of die verkeerde put geplaas word. Hierdie risiko kan aansienlik verminder word deur maklik waarneembare nasien van die putte. Deur die outomatisering van die resepteringsstappe, word die 'menslike faktor', dws foute en gebruikersverwante variasies, tot die minimum beperk, en sodoende word die reproduceerbaarheid verhoog, veral in die geval van klein reaksievolumes. Dit vereis dat plate van voldoende dimensionele stabiliteit in 'n werkstasie gebruik moet word. Aangepaste strepieskodes bied addisionele masjienleesbaarheid, wat monsteropsporing deur die hele proses vergemaklik.
Programmering van die termosiklus
Die programmering van 'n instrument kan tydrowend sowel as foutief wees. Verskillende PCR -termiese siklusfunksies werk saam om hierdie prosesstap te vereenvoudig en, die belangrikste, om dit veilig te maak:
Maklike werking en goeie gebruikersvoorligting is die basis van doeltreffende programmering. Opbou op hierdie fondament, sal die wagwoordbeskermde gebruikersadministrasie voorkom dat u eie programme deur ander gebruikers verander word. As verskeie fietsryers (van dieselfde tipe) gebruik word, is dit voordelig as 'n program direk van een instrument na 'n ander oorgedra kan word via USB of konnektiwiteit. Rekenaarsagteware stel sentrale en veilige administrasie van programme, gebruikersregte en dokumente op 'n rekenaar moontlik.
PCR Run
Tydens die lopie word DNA versterk in die reaksietap, waar elke monster aan identiese, konsekwente reaksietoestande onderwerp moet word. Die volgende aspekte is relevant vir die proses:
Temperatuurbeheer
Uitstekende akkuraatheid in temperatuurbeheer en homogeniteit van die siklusblok vorm die basis vir eweredige temperatuurversorging van alle monsters. Die hoë gehalte van die verwarmings- en verkoelingselemente (Peltier -elemente), sowel as die manier waarop dit aan die blok gekoppel is, is die beslissende faktore wat die risiko van temperatuur teenstrydighede, bekend as die 'randeffek', sal bepaal
Verdamping
Die konsentrasies van die individuele reaksiekomponente moet nie verander gedurende die reaksie as gevolg van verdamping nie. Andersins is dit moontlik dat baie minPCR -produkkan gegenereer word, of glad nie. Dit is dus uiters belangrik om verdamping te verminder deur 'n veilige seël te verseker. In hierdie geval werk die verhitte deksel van die termosiklus en die seël van die vaartuig hand aan hand. Daar is verskillende seëlopsies beskikbaar virPCR -plate (skakel: seëlartikel), waardeur die beste seël bereik word deur hitte -verseëling. Ander sluitings kan ook geskik wees, solank die kontakdruk van die siklusdeksel by die geselekteerde seël aangepas kan word.
Prosesstandaardisering is in plek om die akkurate en reproduceerbare resultate op lang termyn te beskerm. Dit sluit gereelde instandhouding van die toerusting in om te verseker dat dit altyd in 'n goeie werkende toestand is. Alle verbruiksgoedere moet deurlopend van hoë gehalte wees van alle lotte wat geproduseer word, en die betroubare beskikbaarheid daarvan moet gewaarborg word.
Postyd: Nov-29-2022