Hoe om klein volumes met handpipette te pipetteer

Aangesien meer fokus op die vermindering van reagense en koste geplaas word, is kleiner volumes in groot aanvraag, bv. vir die voorbereiding van PCR Mastermix of ensiemreaksies. Maar die pipettering van klein volumes van 0,2 – 5 µL stel nuwe uitdagings vir pipettering akkuraatheid en presisie. Die volgende punte is noodsaaklik:

1. Pipet- en puntgrootte: Kies altyd die pipet met die laagste nominale volume moontlik en die kleinste punt om die lugkussing so klein as moontlik te hou. Wanneer 1 µL bv pipetteer, kies 'n 0.25 – 2.5 µL pipet en bypassende punt eerder as 'n 1 – 10 µL pipet.
2. Kalibrasie en instandhouding: Dit is noodsaaklik dat jou pipette behoorlik gekalibreer en onderhou word. Klein aanpassings en stukkende dele op 'n pipet lei tot 'n massiewe toename in sistematiese en ewekansige foutwaardes. 'n Kalibrasie volgens ISO 8655 moet een keer per jaar uitgevoer word.
3. Positiewe verplasingspipette: Kyk of jy 'n positiewe verplasingspipet met 'n lae volume reeks in jou laboratorium het. Oor die algemeen lei die gebruik van hierdie tipe pipet tot 'n beter pipetresultaat in terme van akkuraatheid en presisie as met klassieke lugkussingspipette.
4. Probeer om groter volumes te gebruik: Jy kan oorweeg om jou monster te verdun om groter volumes met dieselfde hoeveelheid in die finale reaksie te pipetteer. Dit kan pipeteringsfoute verminder met baie klein monstervolumes.

Benewens 'n goeie hulpmiddel, moet die navorser 'n baie goeie pipettegniek hê. Gee spesiale aandag aan die volgende stappe:

1. Punt aanhegting: Moenie die pipet op die punt vassteek nie, aangesien dit die fyn puntpunt kan beskadig en veroorsaak dat die vloeistofstraal herlei word of die opening kan beskadig. Pas slegs ligte druk toe wanneer 'n punt geheg word en gebruik 'n pipet met 'n veerbelaaide puntkeël.
2. Hou die pipet vas: Moenie die pipet in jou hand hou terwyl jy wag vir die sentrifuge, siklusmasjien, ens. Die binnekant van die pipet sal verhit word en die lugkussing laat uitsit, wat lei tot afwykings van die vasgestelde volume tydens pipettering.
3. Voorbenatting: Die bevochtiging van die lug binne die punt en pipet berei die punt voor vir die monster en vermy verdamping wanneer die oordragvolume gesuig word.
4. Vertikale aspirasie: Dit is baie belangrik wanneer klein volumes hanteer word om die kapillêre effek te vermy wat plaasvind wanneer die pipet teen 'n hoek gehou word.
5. Dompeldiepte: Dompel die punt so min as moontlik in om te verhoed dat vloeistof die punt binnedring as gevolg van die kapillêre effek. Duimreël: Hoe kleiner die punt en volume, hoe laer is die indompeldiepte. Ons beveel 'n maksimum van 2 mm aan wanneer klein volumes pipetteer.
6. Dispensering teen 'n hoek van 45°: Optimale uitvloei van die vloeistof word gewaarborg wanneer die pipet teen 'n hoek van 45° gehou word.
7. Kontak met vaartuigwand of vloeistofoppervlak: Klein volumes kan slegs behoorlik afgegee word wanneer die punt teen die vaartuigwand gehou word, of in vloeistof gedompel word. Selfs die laaste druppel van die punt af kan akkuraat uitgegee word.
8. Uitblaas: 'n Uitblaas is verpligtend na reseptering van lae volumes om selfs die laaste druppel vloeistof wat in die punt teenwoordig is, uit te gee. Die uitblaas moet ook teen die vaartuigwand uitgevoer word. Wees versigtig om nie lugborrels in die monster te bring wanneer 'n uitblaas by die vloeistofoppervlak uitgevoer word nie.